期刊简介
本刊是中国第一本在国内外公开发行、有较多特色和较大影响的微循环、血液流变学专业学术期刊。本刊立足于科研前沿、深入报道该学科基础和临床新进展、荟萃国内外多学科最新医研成果，兼顾推广、普及和提高。本刊形态新颖，内容丰富，栏目设置合理，信息渠道畅通，作者群稳定，编辑经验丰富，论文发表周期短，质量较高，深爱广大科研人员和医务工作者欢迎和好评。
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- 杂志名称：微循环学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：武汉大学人民医院,中国病理生理学会微循环专业委员会
- 国际刊号：1005-1740
- 国内刊号：42-1321/R
- 出版周期：季刊
期刊荣誉：湖北省科学技术期刊“先进集体”(99-00）期刊收录：上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 国家图书馆馆藏
基质金属蛋白酶-9靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测
顾晓琼；万根平；陈兆鸿
关键词：小干扰RNA, 基质金属蛋白酶, 川崎病, 血管内皮细胞
摘要：目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体, 并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果.方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列, 体外分别合成两端含BamHⅠ和 Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定.阳性重组质粒测序.将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR 法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9 mRNA 表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9siRNA质粒进行效应检测.结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合.KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05).结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础.
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